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HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計(jì)算?

更新時(shí)間:2022-09-23

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  各位小伙伴都聽說(shuō)過(guò)死體積吧。死體積越大,導(dǎo)致樣品擴(kuò)散的空間很大,色譜峰會(huì)更容易展寬,峰形變差。那么死體積該如何定義呢,死體積大小如何計(jì)算,這里小編就給各位小伙伴做個(gè)介紹。
 
  死體積的定義:
 
  死體積狹義上指的是Hamilton 離子排斥色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積,即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置(進(jìn)樣口)到檢測(cè)位置(檢測(cè)器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),一旦色譜柱連接,這段體積(圖示橙色管路)是不變的(死的)。
 
  HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計(jì)算?
 
  死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動(dòng)相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過(guò)程,其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。
 
  死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間。即流動(dòng)相(溶劑)通過(guò)色譜柱的時(shí)間。
 
  測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量,常用方法是通過(guò)進(jìn)一針和色譜柱固定相沒(méi)有任何作用的特殊溶液(方法中會(huì)有規(guī)定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液,也有直接用*色譜純甲醇進(jìn)樣的情形)時(shí),就會(huì)得到一個(gè)色譜峰,由此峰可以測(cè)得死時(shí)間(t0),這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果。
 
  然后通過(guò)計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:
 
  死體積(V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。
 
  減小死體積的注意事項(xiàng):
 
  在我們使用或維護(hù)的過(guò)程中,如果涉及管路等配件的更換,應(yīng)該選擇與原規(guī)格一致的配件,以確保死體積與原來(lái)一致,避免死體積的增加而帶來(lái)峰形的展寬。
 
  接裝色譜柱時(shí),需確保管線接頭匹配完好(特別注意peek管接頭的使用,以及管線與色譜柱的連接處)避免形成接頭空腔.
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